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CHX伙同MG132检测卵白质踏实性的圭臬
发布日期:2024-09-30 20:48    点击次数:83

CHX伙同MG132检测卵白质踏实性的圭臬

CHX是灰链霉菌的居品,相似用于检测卵白质或酶的半衰期。CHX欺压细胞总卵白合成的旨趣是阻断真核细胞核糖体易位历程。用相宜浓度的CHX处置细胞(相似为100μg/mL)不同技巧点,网络细胞样品进行WB履行检测卵白质丰采。

半衰期短的卵白质会跟着时分的推移赶紧降解,而半衰期长的卵白质跟着时分的推移,降解的很少。

CHX常用于检测卵白质的踏实性和半衰期。不才面这个案例中,用50μg/mL的CHX处置6h和12h,WB检测卵白抒发,发现敲低AHI1加快了Tyk2的卵白质降解。

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敲低AHI1加快了Tyk2的卵白质降解(Ying Miao et al. 2023. bio protocol)

还不知谈检测卵白质踏实性和半衰期圭臬的家东谈主不错先望望往期著述:《卵白质踏实性、半衰期履行的旨趣、圭臬和摆布》

MG132又称苄氧羰基-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸,是一种多肽醛。MG132是大家熟知的卵白酶体欺压剂,MG132的作用机制是通过与卵白酶体20S催化中枢的活性位点苏氨酸残基中的羟基半缩醛反馈,从而欺压卵白酶体活性。

不才面这个案例中,使用MG132约略欺压卵白质的泛素化降解,促进泛素化卵白的蕴蓄,从而更容易检测到卵白质的泛素化。如下图的图C所示:在不添加MG132时,即使Bmi-1和Ezh2能被泛素化,也可能会赶紧降解,从而检测不到信号,MG132处置欺压卵白酶体,导致泛素化的卵白蕴蓄,因此更容易检测到泛素化的卵白。

需要相配提防的是,如下图A和B所示,在不添加MG132时,可能检测不到ub信号。

需要泛素化质粒的不错关系小编。

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MG132促进卵白质泛素化(Sivaprakasam B et al. 2012. J Biol Chem)

另外,CHX和MG132也约略伙同起来考证卵白质的踏实性和降解阶梯。举例不才面这个案例中,左边是MG132和CHX聚积处置,右边是只用CHX处置,w/o MG132示意 without MG132。讲解MG132增多了a-SMN卵白的踏实性,而MG132莫得增多FL-SMN的卵白踏实性。

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MG132对a-SMN和FL-SMN卵白半衰期的影响(Denise Locatelli et al. 2015. PLOS ONE)

大家不错字据我方的履行主见生动汲取欺压剂单并立置或聚积处置,从而更成心于发现问题场地,更好的分析效果。

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